Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1HG糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次注意到肝细胞致病催化到注意到1标准型肾病病理病症的重大突破亲率在孩童时期就有很好的刻画，多个肝细胞致病催化感染性的孩童出处70%在血清转换后10周内患上肾病，而随访15年的孩童这一%-增大到84%。相比之下之下，九成病理1标准型肾病一半以上的标准型1标准型肾病的患病机制还从未获得更为好的了解研究。

越来越多的人开始应用于分阶段系统来并不一定1标准型肾病的重大突破：母质在注意到多种肝细胞致病催化时转入第1前期，注意到血糖精神状态时转入第2前期，注意到病症时转入第3前期。一些多发肝细胞致病催化感染性的母质，在1期和2期，重大突破较慢，并持续发展为患病的1标准型肾病。我们先前刻画了一小组在首次探测到多种肝细胞致病催化抽取后至多于10年无肾病的很慢重大突破者，这小组病征数目多于，但特性非常明确。随后，我们见到肝细胞自身免疫甲基化CD8+T受质质催化在重大突破较快的病征当中基本不存在，但在近期患病和长期以来存在的肾病病征当中很更为易探测到。这可能表明，与重大突破病征相比之下，这些病征致病催化的调节增强。

中期了解研究表明，尽管调节性T受质质(Treg)数量也就是说，但肾病病征存在一些功能性缺陷，其当中包括对IL-2的催化控制能力降低。此外，肾病病征当中的现象CD4+T受质质可能对调节更为具抵抗性，表现为现象T受质质的依赖性向西移动，自然现象归因于的Treg和质外归因于的诱发Treg，以及免疫历程的CD4+T受质质当中IL-2催化向西移动。本了解研究的用意是刻画了CD4+调节性T受质质(Treg)在一小群以致于较快重大突破者当中的特性，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访星期为18-32年。

方法：BOX了解研究是一项以一些人依此的纵向了解研究，在21岁以下确诊的病征亲人当中检查1标准型肾病的危险考量。我们先前刻画了长期以来较快重大突破者的特性，他们保持多重肝细胞致病催化感染性超过10年，但从未注意到肾病的病理病症，慢性或非受虐致病。随后，10名此后保持无肾病并情愿发放大量血液抽取的较快重大突破者纳入T和B受质质功能性比对。在现有的了解研究当中，8名慢重大突破者(SP小组)，当中位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁两者之间的肝细胞致病催化感染性。所有的行动者都位处1标准型肾病重大突破的1期，尽管一些人随后失去了肝细胞致病催化对某些免疫的感染性催化，然而，一名病征早就位处2期至多于6年，但从未注意到病理病症，一名病征被诊断为肾病，该人会72岁，在野外检验抽取时，其HbA1c消退到53 mmol/mol(7%)，在数据比对当中对该诱发顺利进行了单独审催化器。转化外周血单个催化器受质质(PBMCs)，采用多匹配流式受质质拳法和T受质质依赖性试验审催化器诱发当中Treg的kHz、环境考量和功能性。应用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)顺利进行无全权负责聚类比对，审催化器Treg环境考量。

结果：与心理健康诱发相比之下，来自慢重大突破质的无意识CD4+T受质质的全权负责聚类辨识，酪氨酸的无意识CD4+ TregkHz增大，与抑制作用诱发的TNFR相关受质(GITR)隐含增大有关。一名HbA1c消退的病征与重大突破较快者和冗余的IgG相比之下，Treg明人有所完全相同。功能性最近，与心理健康诱发相比之下，来自较快重大突破质的Treg酪氨酸的CD4+现象T受质质依赖性显着受损。表现为对现象CD4+T受质质CD25和CD134隐含的依赖性增大。

绘出1 了解的环境考量比对辨识，CD4+Treg亚标准型在慢重大突破字段当中增大。由FlowSOM转化成的Treg室，涌进在来自所有诱发的活着CD4+CD45RA -受质质上。根据上标物隐含鉴定出10个元簇:无意识T受质质_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;无意识T cell_4;CD49b无意识T受质质;HLA-DR + GITR +无意识T受质质;存储器Treg_1;存储器Treg_2;存储器Treg_3;和存储器Treg_4。(a)应用于9个完全相同Treg上标转化成的10个元簇的MST。每个终端都有一个炮兵部队(100个炮兵部队)，更为大的元炮兵部队(10个元炮兵部队)在终端小组周围上色。每个终端当中的饼绘出回应单个上标的隐含高级别。(b)每个元聚类的热绘出，以辨识整质上标隐含。(c, d)为HD小组(c)和SP小组(d)转化成绘出，以及FlowSOM辨认的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对于轻元素为每个metacluster盒直通绘出(轻元素> 0.05%)考虑到为HD和SP小组:存储器Treg_2 (e),存储器Treg_3 (f),存储器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +无意识T受质质(h)、无意识T cell_1(i),无意识T cell_2 (j),无意识T cell_3 (k) n d CD49b无意识T受质质(l)。蓝色橘色都有捐助者SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于绘出形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

绘出2 应用于CITRUS的预测模标准型证实，TregkHz的增大是重大突破较快的标志。基准门控(a - f)和甜菜比对(g-k)比较SP行动者和冗余的HD行动者在CD4+CD45RA−T受质质上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社群的都有性绘出。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR隐含顺利进行转化，实时FlowSOM社群。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)小组以及诱发SP 606(蓝色)当中CD25+ cd127的kHz摘要绘出。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控开集的盒直通绘出;(c) HLA-DRloGITR−(存储器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(存储器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(存储器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+存储器T cell)。(g - i)柑桔簇双螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3隐含强度可视，对角突出的簇被辨认为SP和HD字段两者之间的完全相同。(j)盒直通绘出辨识了在SP(蓝点)和HD(灰点)小组当中，CITRUS无意识Treg_3和Treg_4的相对于轻元素(%-)。(k)直方绘出辨识每个簇的环境考量(深蓝色)和Treg上标相对于隐含与背景隐含(蓝色);上列，存储器Treg_3;上面一行，存储器Treg_4。背景与所有其他簇当中上标的隐含有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

绘出3 与心理健康献血者相比之下，重大突破较快者无意识treg的GITR增大。每个无意识CD4+T受质质元簇(无意识T受质质_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;CD49b +无意识T受质质;HLA-DR + GITR +无意识T受质质;存储器Treg_2;存储器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)探测每个隐含上标的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)字段的隐含热绘出(sp606不包括在内)。(c,d)无意识Treg_4元簇当中所有HD(黑色)、所有SP(蓝色)和SP 606(蓝色)的FlowSOM GITR隐含串联，辨识直方绘出(c)和摘要绘出(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(蓝色)所有诱发包括，p< 0.05(蓝色)诱发SP 606和冗余的HD不包括在测试当中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs当中GITR隐含，从基准门控，从所有HD(黑色)、所有SP(蓝色)和SP 606(蓝色)串联，辨识直方绘出(e)和摘要绘出(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

绘出4 来自较快重大突破的CD4+ treg受质质管控现象CD4+T受质质的控制能力降低。SP小组用蓝色的直通和橘色回应，HD小组用黑色的直通和橘色回应，蓝色的直通/橘色回应诱发sp606。应用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T受质质顺利进行分选。CD4+CD25−(此番者)被上标为CFSE, Treg按判读的%-硫酸铜。用抗CD3 /28微珠再生受质质，培育3过后顺利进行流式受质质拳法探测。(a-d)与CD4+此番者相对于应的treg培育(自质)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD此番者培育。(a,b,f) CFSE增生(a,e)和CFSE依赖性平均值(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的依赖性平均值。应用于感染性对照(酪氨酸的响应受质质不含treg)近似值依赖性平均值。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

绘出5 现象CD4+T受质质对较快重大突破的T受质质再生的依赖性更为敏感。SP小组用蓝色的直通和橘色回应，HD小组用黑色的直通和橘色回应，蓝色的直通/橘色回应诱发sp606。应用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T受质质顺利进行分选。CD4+CD25−(此番者)被cfsel上标，treg按判读的%-硫酸铜。用抗CD3 /28微珠再生受质质，培育3过后顺利进行流式受质质拳法(CD25反染)和受质质因次子比对。HD Treg与HD、SP或sp606此番者共同培育。(a,b) CFSE增生(a)和CFSE依赖性百份(b)。(c,d) CD25依赖性百份(c)和CD134依赖性百份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育当中的隐含。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

正确性：我们得出的正确性是，来自较快重大突破次子的再生无意识CD4+Treg在GITR隐含当中获得了扩展和丰富，特别强调了进一步了解研究Treg在1标准型肾病不考虑到性母质当中的异质性的必要性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28