Diabetologia：酪氨酸但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现胰脏自身突变到显现1改型乳癌医学副作用的令人满意数万人在儿童时期就有不错的描绘，多个胰脏自身突变阳性的儿童；还有70%在血清反转后10年内患病乳癌，而随访15年的儿童这一比重上升到84%。相比较之下，占医学1改型乳癌一半以上的改型1改型乳癌的确诊机制还很难获得充分的研究。

越来越多的人开始应用于依此系统来定义1改型乳癌的令人满意：母体在显现多种胰脏自身突变时转到第1先决条件，显现血糖异常时转到第2先决条件，显现副作用时转到第3先决条件。一些多发胰脏自身突变阳性的母体，在1期和2期，令人满意更慢，并发展为确诊的1改型乳癌。我们之前描绘了一四组在首次样品到多种胰脏自身突变采样后最少10年无乳癌的变慢令人满意者，这四组病患者人数少，但基本特征非常明确。随后，我们发现胰脏自身蛋白质甲基化CD8+T终点站粒体自由基在令人满意很慢的病患者之前也就是说不存在，但在近期确诊和长期存在的乳癌病患者之前很容易样品到。这有可能表明，与令人满意病患者相比较，这些病患者自身免疫自由基的可调增强。

早期研究表明，尽管可调性T终点站粒体(Treg)数量正常人，但乳癌病患者存在一些机制不足之处，其之前包括对IL-2的自由基能够降低。此外，乳癌病患者之前的振荡CD4+T终点站粒体有可能对可调更具抵抗性，表现为振荡T终点站粒体的诱发弱化，纯净归因于的Treg和排泄归因于的诱导Treg，以及蛋白质经历的CD4+T终点站粒体之前IL-2自由基弱化。本研究的用以是描绘了CD4+可调性T终点站粒体(Treg)在一小群极很慢令人满意者之前的基本特征，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究是一项以人群为基础的纵向研究，在21岁以下确诊的病患者亲属之前检查1改型乳癌的危险因素。我们之前描绘了长期很慢令人满意者的基本特征，他们保持多重胰脏自身突变阳性超过10年，但很难显现乳癌的医学副作用，慢性或非来进行性自身免疫。随后，10名一直保持无乳癌并愿意提供大量血液采样的很慢令人满意者构建到T和B终点站粒体机制量化。在迄今的研究之前，8名慢令人满意者(SP四组)，之前位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁二者之间的胰脏自身突变阳性。所有的参与者都受制于1改型乳癌令人满意的1期，尽管一些人随后失去了胰脏自身突变对某些蛋白质的阳性自由基，然而，一名病患者之前受制于2期最少6年，但很难显现医学副作用，一名病患者被临床为乳癌，该受试者72岁，在采集实验采样时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据量化之前对该诱导来进行了单独评估。分离外周血单个核终点站粒体(PBMCs)，改用多参数流式终点站粒体忍术和T终点站粒体诱发试验评估诱导之前Treg的频数万人、表改型和机制。应用于FlowSOM和CITRUS(聚类比对、相关联和复出)来进行无行政官员聚类量化，评估Treg表改型。

结果：与健康诱导相比较，来自慢令人满意体的无意识CD4+T终点站粒体的行政官员聚类看出，激活的无意识CD4+ Treg频数万人上升，与止痛药诱导的TNFR相关酶(GITR)理解上升有关。一名HbA1c升高的病患者与令人满意很慢者和意味着的对应四组相比较，Treg谱有所多种不同。机制量化表明，与健康诱导相比较，来自很慢令人满意体的Treg介导的CD4+振荡T终点站粒体诱发明显受损。表现为对振荡CD4+T终点站粒体CD25和CD134理解的诱发上升。

左图1 系统地的表改型量化看出，CD4+Treg亚改型在慢令人满意配置文件之前上升。由FlowSOM生成的Treg室，聚集在来自所有诱导的活CD4+CD45RA -终点站粒体上。根据上标物理解比对出10个元簇:无意识T终点站粒体_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;无意识T cell_4;CD49b无意识T终点站粒体;HLA-DR + GITR +无意识T终点站粒体;内核Treg_1;内核Treg_2;内核Treg_3;和内核Treg_4。(a)应用于9个多种不同Treg上标生成的10个元簇的MST。每个数据流均是由一个炮兵部队(100个炮兵部队)，大得多的元炮兵部队(10个元炮兵部队)在数据流四组周边上色。每个数据流之前的饼左图说明单个上标的理解级别。(b)每个元聚类的热左图，以看出整体上标理解。(c, d)为HD四组(c)和SP四组(d)生成左图，以及FlowSOM上标的每个元簇的较厚。(e-l)相比原子量为每个metacluster箱子终点站左图(原子量> 0.05%)确定为HD和SP四组:内核Treg_2 (e),内核Treg_3 (f),内核Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +无意识T终点站粒体(h)、无意识T cell_1(i),无意识T cell_2 (j),无意识T cell_3 (k) n d CD49b无意识T终点站粒体(l)。橙色带子均是由**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对大写字母秩检验。此键适用于左图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

左图2 应用于CITRUS的预测模改型证实，Treg频数万人的上升是令人满意很慢的标志。分级暂时性(a - f)和柑橘量化(g-k)比较SP参与者和意味着的HD参与者在CD4+CD45RA−T终点站粒体上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的均是由性左图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3石英砂，然后通过HLA-DR和GITR理解来进行分离，虚拟FlowSOM群体。(b) HD(黑点)和SP(白点)四组以及诱导SP 606(橙色)之前CD25+ cd127的频数万人汇总左图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+暂时性子集的箱子终点站左图;(c) HLA-DRloGITR−(内核Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(内核Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(内核Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+内核T cell)。(g - i)柑桔簇锥形由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3理解强度着色，箭头厚实的簇被上标为SP和HD配置文件二者之间的多种不同。(j)箱子终点站左图看出了在SP(白点)和HD(灰点)四组之前，CITRUS无意识Treg_3和Treg_4的相比原子量(比重)。(k)直方左图看出每个簇的表改型(粉色)和Treg上标相比理解与或多或少理解(红色);上列，内核Treg_3;下面一行，内核Treg_4。或多或少与所有其他簇之前上标的理解有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对大写字母秩检验

左图3 与健康献血者相比较，令人满意很慢者无意识treg的GITR上升。每个无意识CD4+T终点站粒体元簇(无意识T终点站粒体_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;CD49b +无意识T终点站粒体;HLA-DR + GITR +无意识T终点站粒体;内核Treg_2;内核Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)样品每个理解上标的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)配置文件的理解热左图(sp606不包括在内)。(c,d)无意识Treg_4元簇之前所有HD(棕色)、所有SP(红色)和SP 606(橙色)的FlowSOM GITR理解串联，看出直方左图(c)和汇总左图(d)。Wilcoxon配对大写字母秩和检验，p< 0.07(橙色)所有诱导包括，p< 0.05(红色)诱导SP 606和意味着的HD不包括在测试之前。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs之前GITR理解，从分级暂时性，从所有HD(棕色)、所有SP(红色)和SP 606(橙色)串联，看出直方左图(e)和汇总左图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对大写字母秩检验

左图4 来自很慢令人满意的CD4+ treg终点站粒体控制振荡CD4+T终点站粒体的能够降低。SP四组用红色的终点站和带子说明，HD四组用黑色的终点站和带子说明，橙色的终点站/带子说明诱导sp606。应用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T终点站粒体来进行分选。CD4+CD25−(接收者者)被上标为CFSE, Treg按观察的比重反应物。用抗CD3 /28微珠增殖终点站粒体，人才培养3同月来进行流式终点站粒体忍术样品。(a-d)与CD4+接收者者相比应的treg人才培养(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD接收者者人才培养。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE诱发百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱发百分比。应用于阳性对应(激活的拥护终点站粒体不含treg)计算出来诱发百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差量化。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

左图5 振荡CD4+T终点站粒体对很慢令人满意的T终点站粒体增殖的诱发更敏感。SP四组用红色的终点站和带子说明，HD四组用黑色的终点站和带子说明，橙色的终点站/带子说明诱导sp606。应用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T终点站粒体来进行分选。CD4+CD25−(接收者者)被cfsel上标，treg按观察的比重反应物。用抗CD3 /28微珠增殖终点站粒体，人才培养3同月来进行流式终点站粒体忍术(CD25反染)和终点站粒体因子量化。HD Treg与HD、SP或sp606接收者者共同人才培养。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE诱发百分数万人(b)。(c,d) CD25诱发百分数万人(c)和CD134诱发百分数万人(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在大一之前的理解。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差量化。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

推论：我们得出的推论是，来自很慢令人满意子的增殖无意识CD4+Treg在GITR理解之前获得了构建和丰富，凸显了进一步研究Treg在1改型乳癌风险母体之前的异质性的必要性。

原文中有：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28